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一種高度可擴展的M威博娛樂城方法來監控蛋白質水平和定位

到目前為止,科學家通常通過使用熒光標籤一次標記並跟踪一種蛋白質來研究蛋白質的變化及其在細胞中的作用。這種方法限制了可以研究的蛋白質數量,並排除了無偏見的發現方法。奧地利科學院分子醫學研究中心CeMM的研究人員現已開發出一種高度可擴展的方法,該方法可並行研究數百種蛋白質,以監測其水平和細胞內定位的變化。這種新穎的策略不僅對未來針對癌症等疾病的藥物開發,而且對我們對蛋白質組動力學的一般理解和認識都做出了顯著貢獻。他們的發現現已發表在著名的科學雜誌上 基因組研究。.

蛋白質是細胞中的大分子,是人體組織和器官的結構,功能和調節所必需的。它們幾乎負責細胞生命的每項任務,並且可以隨著它們所服務的功能而多樣化。蛋白質水平及其在細胞內的定位調節許多細胞過程的重要方面,並可能成為藥物治療的重要目標。例如,可以通過影響細胞中蛋白質產生和降解的藥物進行治療性干預來增加或減少蛋白質的豐度。蛋白質也可以在不同的細胞間移動完美娛樂城時間,從而改變其功能。其他蛋白質可能會響應外部刺激而與不同位置結合,例如發生DNA損傷的區域。

傳統上,科學家使用熒光標籤標記單個蛋白質並研究其在細胞中的作用。綠色熒光蛋白(GFP)與他們想要研究的某種蛋白質的末端融合在一起。然後,這種蛋白融合物在細胞中表達,通過熒光顯微鏡,他們可以觀察到表達標記蛋白的細胞。該方法允許以時間分辨的方式針對單個蛋白質研究許多擾動,例如不同的藥物劑量。相反,質譜不適合以無偏見的方式在特定時間點以高可擴展性水平研究和監測蛋白質組(蛋白質的整個補體)上的這些細胞擾動。

CeMM首席研究員Stefan Kubicek研究小組的Andreas Reicher和Anna Koren開發了一種新穎的策略,該方法首次使人們能夠觀察和表徵p中大量蛋白質的變化娛樂城的相關搜尋阿勒。該方法不僅可以用來描述和更好地了解某些已知藥物在細胞中的作用,而且可以發現通過影響和調節細胞中蛋白質水平或定位來起作用的新藥物治療方法。

CeMM研究人員設計了一種方法來克服基於CRISPR-CAS9的內含子標籤中的瓶頸:需要開發一種方法可以對整個蛋白質組或其中的很大一部分發光,而不僅僅是在一個蛋白質組上發光一種蛋白質的方法。時間。為了克服這個問題,CeMM研究人員設計了一種生成包含數百種標記蛋白的細胞池的方法,並且在每個細胞中,不同的蛋白都用GFP標記。這些細胞池暴露於BRD4的PROTAC化學降解劑中,後者是在胚胎髮生和癌症發展過程中起關鍵作用的轉錄調節因子。研究人員隨後使用延時顯微鏡觀察了細胞池中任何標記蛋白的水平或亞細胞定位是否發生變化,以應對應用的治療。重要的是,他們應用了CRISPR-Cas9標記策略,然後使他們能夠通過使用整個細胞池的原位測序來鑑定哪些蛋白質改變了定位。因此,t娛樂城廣告嘿證實了這些藥物的已知靶標,但也揭示了意想不到的變化。特別是對於BRD4信號的擾動,他們能夠報告六個蛋白質的定位變化,而以前其他任何高通量方法都無法識別這六個蛋白質。最後,他們還表明,該方法揭示了預期的和新穎的蛋白質定位變化,用於研究干擾,使用娛樂城註冊送現金 批准的抗癌藥氨甲蝶呤。

CeMM首席研究員Stefan Kubicek解釋說:我們的研究描述了一種技術,該技術不僅首次將內含子標籤應用於基因庫,而且在所有三個步驟(內含子標籤,細胞成像和原位測序)中均進行了顯著優化,以使該過程在最大程度上實現。有效的方法。該方法適用於化學文庫和候選分子,對開發和深化包括誘導和抑制蛋白質-蛋白質相互作用和化學降解在內的藥物特別有效。描述的策略可能會加速藥物濫用通博娛樂城隱蔽性,並且對整體和亞細胞蛋白質組動力學的研究有很大影響。

參考:Reicher A,Koren A,KubicekS。匯集的蛋白質標籤,細胞成像和原位測序可實時監測藥物作用。 基因組研究。 2020年。doi:10.1101 / gr.261503.120。

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