CRISPR / Cas9現在是與基因工程研究相關的家喻戶曉的名稱。通過他們的論文中描述的前沿研究 科學報告由東京科學大學，明治大學和東京農業科技大學的研究人員組成的團隊，由高木剛三博士和桑田茂教授領導，最近建立了一系列新穎的策略來提高目標基因破壞和新基因的效率。使用CRISPR / Cas9系統在稻瘟病菌稻瘟病菌（Pyricularia（Magnaporthe）oryzae）中“導入”基因。這些策略包括更快（單步）導入基因，使用小的同源序列以及繞開某些必備的宿主DNA“模式”和宿主成分修飾。
由Arazoe博士和Kuwata教授領導的團隊設計了簡單快速的基因編輯技術（目標基因破壞，序列替換和重新引入）台灣娛樂城 使用CRISPR / Cas9在水稻稻瘟病菌Pyricularia（Magnaporthe）稻米中，這是一種絲狀真菌。在令人鼓舞的結果的刺激下，研究人員推測 新球網娛樂城“植物及其病原體仍在自然界中發展。利用模型病原性真菌的突變機製作為基因組編輯技術，可能會導致基因工程領域更多新技術的發展。”
CRISPR / Cas9系統的工作組件與目標基因區域（DNA）結合併在DNA中引起位點特異性539開獎結果雙鏈斷裂（DSB）。該成分的有效結合需要某種稱為“原間隔物基序”（PAM）的“基序”或“模式”，該基序緊隨目標基因區域的下游。
大多數基因組編輯技術都需要在靶位點誘導DSB，從而觸發宿主中的DNA“修復”途徑。同源重組（HR）是修復DSB的機制，它很有用，因為它添加了互補序列。但是，底層方法非常費力，其效率通常取決於外部因素，例如宿主屬性以及PAM。 HR可以分為兩種途徑：“非交叉”（基因轉換）和“交叉”類型。已知交叉型修復發生在減數分裂的細胞中。但是，對它們在經歷有絲分裂的細胞中的作用的理解是有限的，並且關於絲狀真菌的此類信息實際上是不可用的。研究人員希望解決的正是這種知識差距。
在他們的研究中，研究人員首先創建了一個基於CRISPR / Cas9的載體（基因傳遞系統），以確認稻瘟病菌受體基因區域的交叉型HR。
然後，為了檢查基因靶向或“序列捕 魚 達人 機 台取代”，他們創建了一個針對單交叉型HR優化的“突變”載體，用於靶向破壞編碼鞘氨醇脫水酶（SDH）（一種涉及黑色素形成的蛋白質）的宿主基因。將該載體引入含有潮黴素B磷酸轉移酶（hph）基因的載體中，該基因賦予了對抗生素潮黴素B的抗性。研究人員推測，單個交叉型HR將整個載體與hph一起插入靶位點。 SDH基因被破壞的突變體將被鑑定為白色菌落（由於tha娛樂城研究人員發現，使用CRISPR / Cas9載體可顯著增加抗潮黴素B的白色菌落的數量，這意味著CRISPR / Cas9系統可有效誘導單次交叉。 HR類型。該技術的最大好處是它需要極短的同源序列（100個鹼基對；在分子生物學中確實很小）。
研究人員還使用類似的策略來檢查是否可以通過使用CRISPR / Cas9載體的單交叉型HR進行基因導入地下539開獎（或“敲入”）。他們使用了綠色熒光蛋白（GFP）基因，該基因被廣泛用作“報告基因”，使宿主細胞插入基因組後發出綠色熒光。他們推測單個交叉HR將導致將GFP引入受體序列。實際上，他們發現使用CRISPR / Cas9載體在潮黴素培養基上產生了綠色熒光菌落。這些發現表明，CRISPR / Cas9系統可用於有效的“一步”基因敲入。
這項研究指出了一個令人驚訝的事實，即，PAM並不是真菌中CRISPR / Cas9基因編輯所必需的全部。研究小組讚揚了這項研究的成功，他說：“我們發現絲狀真菌具有獨特的基因組特徵，其中甚至通過切割靶標DNA甚至在體細胞中也可以誘導交叉。我們利用這些特徵破壞靶標DNA和引入“報告基因”。我們還通過一步法成功提高了敲入的效率和速度，這項技術克服了PAM的限制-這是CRISPR / Cas9系統-並啟用更多Flexib娛樂城基因組編輯，這在以前的絲狀真菌研究中一直很困難。”
最後，當被問及這項研究的更廣泛應用時，Arazoe博士和Kuwata教授雄辯地說：“稻瘟病菌是導致水稻毀滅性疾病的重要病原體，稻米是該國的主要食品。基於CRISPR / Cas9我們研究中開發的基因組編輯技術可以加快對該病原體的分子生物學研究，最終有助於穩定食品供應和植物性食品安全，而且該技術還適用於工業中廣泛使用的其他絲狀真菌，尤其是在生物加工中，食品和發酵行業。”
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